загальність
Імунофіксація є лабораторним тестом, який дозволяє ідентифікувати і типізувати гамма-глобуліни, присутні в біологічному зразку.
Детально, аналіз дозволяє вивчити - в крові або сечі пацієнта - класи імуноглобулінів (IgA, IgG, IgM, IgE або IgD) і тип каппа або лямбда легкого ланцюга, відповідно до їх конкретної електрофоретичної рухливості., Згодом для ідентифікації гамма-глобуліну, імунофіксація включає в себе інокуляцію специфічних антигенів для фрагмента або відповідного антитіла ( анти-імуноглобулінові антисироватки ): наявність підозрюваної зміни підтверджується формуванням осаду, видимого неозброєним оком або мікроскопом.
Ця інформація має велике значення для встановлення, зокрема, діагностики патологій плазматичних клітин (гаммопатії або дискразії плазмових клітин). Імунофіксація є дуже корисною для оцінки і моніторингу множинної мієломи, макроглобулінемії Вальденстрема і первинного амілоїдозу (також називається амілоїдозом легкої ланцюга).
які
Імунофіксація (або імуноелектрофорез, також скорочена в абревіатурі IFE ) є методикою, здатною визначити, чи є і який клас імуноглобулінів (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) або тип каппа або лямбда легкого ланцюга, присутній у надлишок або дефект у сироватці крові пацієнта і сечі.
Легкі ланцюги каппа і лямбда характеризують моноклональний компонент, тобто антитіла з однаковою ідентичною хімічною структурою.
Сироватка та імунофіксація сечі: коли це вказується?
Плазмацеллюлярние дисплазії або гаммопатії є гетерогенною групою порушень невідомої етіології, що характеризуються:
- Непропорційна проліферація клону В-клітин ;
- Наявність у сироватці та / або сечі типу імуноглобуліну (або його поліпептидної субодиниці) структурно і електрофоретично гомогенно ( моноклонально ).
Як правило, дискразію плазматичних клітин діагностують за допомогою електрофорезу білків сироватки і сечі, а потім імунофіксації сироватки (IFE).
У той же час може бути призначений аналіз крові для вимірювання загальної концентрації імуноглобулінів (IgG + IgM + IgA).
Дізнатися більше: Імуноглобуліни - Які вони є, як вони вимірюються і довідкові значення »Імунофіксація: основний принцип
Імунофіксація - це обстеження, яке включає дві фази (спочатку електрофорез в агарозному гелі, потім імунопреципітацію з певними антисироватками ).
Перший крок імунофіксації такий же, як і у ЕЛЕКТРОФОРЕЗУ білків (або протідограмм), тому необхідно пам'ятати деяку концепцію:
- Електрофорез - це лабораторний аналіз, який дозволяє визначити кількість білків, що знаходяться в сироватці крові або в інших біологічних зразках, і для кожної фракції виявляє наявність аномалій якості. Зокрема, це дослідження дозволяє розділити білки на п'ять груп: альбумін, альфа 1 глобулін, альфа 2 глобулін, бета-глобулін і гамма-глобулін ; останні досліджуються більш конкретно з імунофіксацією.
- Електрофорез є розділовим методом, заснованим на різній швидкості міграції електрично заряджених частинок, через розчин і інертне середовище підтримки, під впливом електричного поля, що генерується постійним струмом. На практиці екзамен використовує електричний заряд і молекулярну масу білків, що знаходяться в зразку пацієнта. Під імпульсом електричного поля ці макромолекули мігрують і "групуються" за типом, реагуючи на напругу характерним чином. Результат ( электрофоретическая трасування ) складається з різних піків і кривих, до яких відповідають білкові фракції. Як правило, перший пік, більш високий і більш вузький, являє собою альбумін ; Далі ми спостерігаємо піки глобулінів, набагато нижчі, ніж альбумін. Збільшення або зменшення амплітуди і інтенсивності піків, що утворюються на шляху, вказують на більшу або меншу присутність білків у кожній категорії; чим більше білків присутні в смузі, тим вище відповідний пік. У випадку гамма-глобулінів, якщо потрібно знати кількість кожного з різних класів (IgA, IgM, IgG і т.д.), необхідно буде звернутися до одноразової дози. Загалом, чим більше гамма-глобулінів присутня в смузі, тим більший відповідний пік; висота відповідає загальній кількості білків, що належать до певної категорії.
IMMUNOFISSATION надає:
1) Електрофорез агарозного гелю : зразок пацієнта (сироватка або сеча) осаджують на електрофоретичній смузі, тобто підтримують міграцію (зазвичай, агарозний гель). Завдяки застосуванню електричного поля, що генерується постійним струмом, отримують розділення в різних діапазонах. На практиці кожен тип гамма-глобуліну, присутнього в суміші (тобто в зразку пацієнта), мігрує на основі молекулярної маси і електричного заряду. Різна електрофоретична рухливість гамма-глобулінів дозволяє ідентифікувати їх (кожен з них збігається з певною смугою в електрофоретичному шляху) і спостерігати за аномаліями.
2) Імунопреципітація з певними антисироватками (фіксація) : специфічні антигени для специфічного антитіла або фрагмента додають індивідуально до кожної електрофоретичної смуги (анти-IgG, анти-IgA, анти-IgM, анти-легка каппа або анти-ланцюг) лямбда легкого ланцюга). Якщо моноклональний білок присутній, то взаємодія антигену з відповідним антитілом буде виробляти вузьку смугу (це означає, що результат є позитивним) і утворення осаду, видимого неозброєним оком або мікроскопом. Нарешті, зразок обробляють (тобто промивають і пофарбовують) для видалення білків, які не осаджують, для отримання сушіння гелю і продовження зчитування результатів.
Чому він працює
Що таке іммунофіксація?
Імунофіксація сироватки - це іспит, призначений для діагностики або моніторингу захворювань, що характеризуються зміною гамма-глобулінів, особливо коли це стосується продукції моноклонального компонента ( моноклональної гаммопатії ).
Дізнатися більше: Моноклональні гаммопатії - що і які »Імунофіксація корисна у випадках підозри на дискразію плазматичних клітин і є фундаментальним для вивчення MIELOMA (і споріднених патологій) і MGUS (акронім для "моноклональних гаммопатій невизначеного значення").
Цей тест також дозволяє оцінити макроглобулінемію Вальденстрема і амілоїдоз легкої ланцюга ( АЛ ).
Імунофіксація: коли призначено обстеження?
Індикація на імунофіксацію є наслідком клінічних або лабораторних доказів, які викликають підозру на зміну моноклональних антитіл або імуноглобулінів у сироватці або сечі.
Наприклад, цей іспит дозволяє поглибити результат серопротекторного або сечового електрофорезу: коли в електрофоретичному трасі, смуги, що відповідають гамма-глобулінам, відхиляються від нормальної, імунофіксація визначає, які з цих білків змінені за кількістю та якість.
Підсумовуючи, можна встановити иммунофиксацию сироватки:
- У випадку, коли інші лабораторні тести забезпечують аномальний результат, з точки зору відсутності або меншої кількості більшої кількості білків плазми щодо норми;
- При наявності захворювань, що характеризуються виробництвом моноклонального компонента, підозрюють, наприклад:
- Множинна мієлома та її варіанти;
- Макроглобулінемія Вальденстрема;
- амілоїдоз;
- Коли у пацієнта розвиваються симптоми і ознаки, що свідчать про наявність моноклональної гаммопатії або множинної мієломи, таких як:
- Кісткові болі;
- анемія;
- Легка втома;
- Рецидивні інфекції;
- Незрозумілі переломи.
У разі множинної мієломи електрофорез білків і иммунофиксация є значним корисним для моніторингу прогресування захворювання (спостереження).
Імунофіксація: на яких зразках можна виконувати?
Біологічні зразки, які можуть бути піддані імунофіксації, в основному:
- Сироватка (імунофіксація сироватки);
- Сеча (иммунофиксация сечі);
- Лікер * (імунофіксація ліквору).
* Примітка : CSF або спинномозкова рідина є рідиною, яка пронизує і захищає мозок, спинний мозок, черепні нерви і коріння хребта.
Нормальні значення
НЕГАТИВНИЙ результат сироваткової та сечової иммунофиксации для моноклональних або поліклональних гамма-глобулінів вважається НОРМАЛЬНИМ .
Гамма-глобуліни
Гамма-глобуліни складають 9-20% загальних білків плазми.
- Опорне значення Гамма-глобулін : 0, 9-1, 4 г / дл
Що стосується загальної концентрації імуноглобулінів ( IgG + IgM + IgA ), вважається, що значення між 600 і 2300 мг / дл є нормальними.
- Опорне значення иммунобулинов в сироватці :
- IgA : 90-400 мг / дл
- IgG : 800-1800 мг / дл
- IgM : 60-280 мг / дл
- IgD : 0, 3-0, 4 мг / дл
- IgE : 20-440 мг / дл
Примітка : контрольний інтервал іспиту може незначно змінюватися в залежності від віку, статі та приладів, що використовуються в лабораторії аналізу. З цієї причини краще проконсультуватися з діапазонами, переліченими безпосередньо в звіті. Слід також пам'ятати, що результати аналізу повинні оцінюватися в цілому лікарем загальної практики, який знає історію хвороби пацієнта.
Високі значення - причини
Збільшення гамма-глобулінів може бути:
- Поліклональні, якщо продукція імуноглобулінів є гетерогенною, тобто всі компоненти гамма-глобулінів - продукуються або виходять з різних плазматичних клітин - впливають на збільшення;
- Моноклональні, коли гамма-глобуліни виробляються або одержують з одного типу (клону) плазматичних клітин.
Збільшення поліклональних гамма-глобулінів може бути пов'язано з:
- Хронічні запальні захворювання;
- Ревматоїдний артрит;
- Системний червоний вовчак;
- Хронічні захворювання печінки (такі як гепатит і цироз);
- Гострі та хронічні інфекції;
- Недавні імунізації;
- Деякі пухлинні захворювання.
Високі значення моноклональних гамма-глобулінів можуть свідчити про наявність:
- Деякі новоутворення і хронічні запалення;
- Множинна мієлома;
- лімфом;
- Макроглобулінемія Вальденстрема.
Надлишок гамма-глобуліну називається гіпергаммаглобулінемією, тоді як дефіцит відомий як гіпогаммаглобулінемія .
Низькі значення - причини
Зниження гамма-глобулінів може свідчити про наявність різних генетичних захворювань імунної системи, включаючи агаммаглобулінемію або вторинний імунодефіцит (наприклад, СНІД, ниркова недостатність, гострий сепсис і синдром Кушинга).
Зниження значень гамма-глобуліну може також залежати від використання цитостатичних препаратів, імунодепресантів і стероїдів.
Як це виконується
Імунофіксація сироватки
Імунофіксація сироватки включає просту витягання крові з вени руки. Сироватку отримують центрифугуванням біологічного зразка; це дозволяє, фактично, відокремити фракцію, що містить клітини (корпускулярну частину) від рідини однієї крові (плазми). Сироватка крові не містить факторів згортання крові (фібриноген, фактор VIII, фактор V і протромбін).
Іммунофіксація сечі
Для виконання иммунофиксации сечі необхідно зібрати невелику кількість сечі в спеціальному стерильному контейнері. Виходячи з показань лікаря та лабораторії, зразок можна зібрати без точного часу ( випадковий ) або протягом 24 годин .
Імунофіксація спирту
Аналіз вимагає прийому невеликої кількості спинномозкової рідини через вставку голки всередину порожнини спинного відділу ( люмбальна пункція ).
підготовка
Імунофіксація: як ви готуєтеся до іспиту?
- До забору крові деякі лабораторії можуть вимагати від вас спостерігати пост не менше 10-12 годин. За цей час допускається невелика кількість води.
- Імунофіксацію можна проводити на сечу, зібрану в певний час дня (випадково) або протягом 24 годин, тому необхідно заздалегідь отримати відповідні стерильні контейнери.
- Що стосується імунофіксації ліквору, замість цього не потрібний конкретний препарат.
Що може змінити результат іспиту?
Деякі лікарські засоби можуть впливати на результат імунофіксації, тому доцільно повідомляти лікареві про будь-які поточні препарати.
За шість місяців до обстеження, введення вакцин (імунізація) і застосування препаратів, таких як фенитоин, прокаинамид, оральні контрацептиви, метадон і терапевтичний гамма-глобулін, можуть підвищувати концентрацію імуноглобулінів. Інші лікарські засоби, які можуть змінити результат тесту, - кортикостероїди, неоміцин, ацетилсаліцилова кислота і хлорпромазин.
Інтерпретація результатів
Результат імунофіксації оцінюють у поєднанні з результатами інших аналізів. Інтерпретація знаходження є обов'язком лікаря загальної практики або спеціаліста-референта, який може ідентифікувати та порівняти зміни, що впливають на конкретний гамма-глобулін (наприклад, смуга, що збігається з імуноглобулінами G), до певних захворювань. Ця оцінка підтверджує або підтримує діагностичну гіпотезу: загалом, імунофіксація може виявити нормальний профіль гамма-глобуліну або ідентифікувати моноклональний білок або поліклональну модель .
Як тільки захворювання визначено, імунофіксація може бути виконана для:
- Здійснюйте моніторинг захворювання з плином часу, а потім слідуйте за його перебігом (контроль);
- Перевіряють ефективність терапевтичного протоколу .
За і проти іммунофіксації
Порівняно з електрофорезом білків, иммунофиксация:
- Це швидше : результати імунізації зазвичай отримують протягом трьох годин;
- Він є більш чутливим (хоча і трохи): імунофіксація може виявити імуноглобулін, виключений з електрофорезу білка, особливо при низьких концентраціях (менше 1 грам / літр).
Крім того, імунофіксація:
- Він може бути частково автоматизований ;
- Це легко читається і інтерпретується .
Однак, імунофіксація є більш дорогою, ніж електрофорез білка і дозволяє проводити лише аналіз гамма-глобулінів .
Нормальний результат
У иммунофиксации нормальний шлях включає:
- Смуга, що збігається з більш темним імуноглобуліном G ( IgG );
- Смуга, що відповідає найлегшому імуноглобуліну А ( IgA );
- Відсутність смуги для імуноглобуліну M ( IgM );
- Смуга каппа щільніше, ніж смуга лямбда (легкого ланцюга), при співвідношенні 2: 1.
У нормальному результаті смуги великі і відбувається поступове і рівномірне зменшення густини кольору по краях смуги імуноелектрофорезу.
Поліклональні гамма-глобуліни
У деяких випадках всі смуги імунофіксації рівномірно затемнюються в тій же мірі. Ця модель представляє наявність поліклональних імуноглобулінів . Також в цьому випадку смуги широкі і перехід до країв імуноелектрофоретичної смуги відбувається поступово. Смуга IgM - зазвичай відсутня - широка.
Моноклональні гамма-глобіни
Коли вузька смуга з гострими краями може бути ідентифікована в маршруті иммунофиксации, це означає, що пошук моноклональних компонентів є позитивним .
Ідентифікація моноклонального імуноглобуліну корисна при діагностиці наступних станів:
- Моноклональна гаммопатія невизначеної значимості (МГУС);
- Множинна мієлома;
- Макроглобулінемія Вальденстрома;
- Амілоїдоз.
Крім того, імунофіксацію можна використовувати для моніторингу терапії дискразій плазматичних клітин (тобто множинної мієломи та макроглобулінемії Вальденстрома). Якщо рівень моноклонального білка зменшується або не виявляється після хіміотерапії, він може вказувати на відповідь на лікування . На противагу цьому, моноклональний білок, що зберігається, незважаючи на лікування, є ознакою рефрактерної хвороби .
Зверніть увагу . Негативний результат імунофіксації не завжди виключає дискразію плазматичних клітин. Наприклад, несекреторная множинна мієлома або олігосекретор може давати негативні результати як у сечі, так і в сироватці. Таким чином, якщо діагностична підозра на гаммопатію залишається високою, визначається співвідношення світлових ланцюгів Каппа / Ламбда Лібера (відношення K / L ).
Імунофіксація та діагностика розсіяного склерозу
Імунофіксацію спинномозкової рідини (ліквору) призначають, коли лікар підозрює наявність розсіяного склерозу . У цьому випадку визначається шлях, який визначається, оскільки він підкреслює наявність так званих олігоклональних смуг . Результат повідомляється в лабораторному звіті як позитивний . Слід враховувати, що смуги зазвичай не спостерігаються в імунофіксації сироватки, оскільки вони корелюють з продукцією інтратекальних гамма-глобулінів .
Однак слід зазначити, що цей висновок не обов'язково підтверджує діагноз, оскільки інші стани можуть відбуватися з олігоклональними смугами в спинномозковій рідині.
Іншими словами, ідентифікація олігоклональних смуг з імунофіксацією ліквору дуже корисна для підтримки діагностики розсіяного склерозу, але повинна бути підтверджена іншими дослідженнями . Іншими умовами, які можуть забезпечити цей результат, є запалення центральної нервової системи, у тому числі: енцефаліт, пов'язаний з ВІЛ, нейросифіліс, нейросаркоїдоз, лаймський менінгоенцефаліт, злоякісні новоутворення ЦНС, нейромієліт зони і поперечний мієліт.
