Реферат ABTS
Це аналітичний метод, який використовує спектрофотометричне вимірювання для визначення антиоксидантної здатності зразка. Використовуючи UV-Vis спектрофотометр, вимірюється абсорбція розчину, що містить радикал ABTS • +, що утворюється при окисленні ABST (2, 2'-азинобіс (3-етилбензотіазолін-6-сульфонат), безбарвна речовина у вигляді радикали забарвлюються поглинанням на характеристиках довжини хвилі у видимому діапазоні Додавання до розчину АБТС + + антиоксидантних молекул, які можуть діяти шляхом перенесення як водню, так і електрона, визначає відновлення радикала до безбарвної форми, Це знебарвлення, пропорційне кількості присутнього антиоксиданту, можна виміряти як зменшення абсорбції протягом певного часу на певній довжині хвилі (734 нм). Антиоксидантна потужність виражається порівнянням з величини абсорбції, виміряні для відомих кількостей молекули антиоксиданту, обраної в якості еталонного стандарту, який зазвичай є аскорбіновою кислотою або тролоксом (у цьому випадку ми говоримо про антиоксидантну активність TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity.
Вимірювання антиоксидантної потужності, що базується на використанні ABTS, має ту перевагу, що вона проста і швидка. Більш того, він дозволяє вимірювати антиоксидантні речовини як гідрофільні, так і ліпофільні в широкому діапазоні рН. Однак слід мати на увазі, що використовуваний радикал (ABTS • +) не є фізіологічним і не присутній в біологічних системах, і часто висвітлюються проблеми повторюваності вимірювань за рахунок кінетики реакцій різних задіяних антиоксидантів.
FRAP (Антиоксидантна потужність, що зменшує залізо)
Тест FRAP вимірює відновлювальну здатність антиоксидантів до іонів заліза. Це метод, заснований на переносі електронів, в якому іони заліза проходять від Fe3 + до Fe2 +. При певних умовах рН (3.6) і в присутності ТПТЗ (2, 4, 6-трис (2-піридил) -с-триазину) ці іони утворюють комплекси з різними характеристиками, зокрема відновлене похідне (Fe2 +) -TPTZ) приймає блакитний колір, який має максимальне поглинання при 593 нм, який може бути виміряний спектрофотометрично. Відновлююча здатність антиоксидантної речовини може, таким чином, бути виміряна як зміна абсорбції розчину, що містить окислювач, на довжині хвилі, встановленої порівнянням з варіантом відносно стандарту (наприклад, аскорбінова кислота).
Тест FRAP був розроблений для вимірювання потужності зниження плазми, але потім був адаптований для тестування антиоксидантної здатності чистих сполук і складних матриць. Насправді, оскільки цей метод дозволяє оцінити тільки зменшувальну здатність за допомогою переносу електронів, повністю ігноруючи дію антиоксидантів, що діють через перенесення водню, це не дозволяє виміряти внесок таких молекул, як тіоли та білки, які грають антиоксидантну роль в біологічних рідинах (наприклад, крові). Перевагою використання цього методу є те, що він є одним з найпростіших, найшвидших і найменш дорогих методів визначення антиоксидантної здатності in vitro.
ТЕСТ
2, 2-дифеніл-1-пикрилгидразил (DPPH •) є дуже стабільним і комерційно доступним азотним радикалом, що характеризується інтенсивним пурпурно-червоним кольором, який притупляється при зниженні в присутності молекули з антиоксидантною здатністю. Спектрофотометричним вимірюванням при 517 нм зміни поглинання розчину DPPH після реакції з антиоксидантною сполукою можна кількісно визначити відновлювальну здатність досліджуваної речовини, чи вона діє з переносом водню або переносом електрона. Результат, як правило, виражають як IC 50, тобто кількість антиоксиданту, здатного знизити початкову концентрацію DPPH на 50%.
Це швидкий, простий і недорогий метод. Межі цієї аналітичної методики наводяться можливістю того, що результати аналізу спотворюються в тому випадку, коли досліджувані молекули поглинають в одному діапазоні довжин хвиль радикалу DPPH або в присутності великих молекул, скупчених стерично, що не вони реагують з реакційною частиною радикала. Це призводить до того, що DPPH реагує з антиоксидантами до 1000 разів повільніше, ніж пероксильні радикали.
ТЕСТ PCL (фотохімілумінесценція)
Тест PCL базується на реакції специфічного виду радикалу, супероксидного аніона (O2 • -), який генерується фотохімічно УФ-випромінюванням, з сполукою, здатною випромінювати хемілюмінесценцію. Використовуваний маркер - це люмінол, молекула, яка при окисленні вільними радикалами випромінює світло, яке можна виміряти за допомогою спеціального приладу (Photochem®). Присутність антиоксидантних речовин у раціоній суміші дезактивує радикальні види, що пригнічують викид хемілюмінесценції. PCL-аналіз дуже швидкий і чутливий. Крім того, із застосуванням двох різних аналітичних протоколів, які називаються ACW (розчинність в антиоксидантній воді) і ACL (розчинність антиоксидантної здатності ліпідів), внесок у загальну антиоксидантну здатність водорозчинного компонента (флавоноїди, вітамін Е) можна виміряти для того ж з'єднання. C, амінокислоти тощо), ніж ліпорозчинні (токофероли, токотриеноли, каротиноїди і т.д.). Антиоксидантну здатність досліджуваного продукту отримують шляхом порівняння значень, записаних з вимірами, що відносяться до стандартних еталонних молекул, аскорбінової кислоти для протоколу ACL і Trolox для протоколу ACW.
